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ESTUDIO CLINICO, ANATOMOPATOLOGICO Y DE BIOLOGIA MOLECULAR

Cuadros entéricos en cerdos de crecimiento y terminación

Compartimos a continuación un resumen de la tesis realizada por Estefanía Marisol Pérez como requisito para optar al título de Doctor en Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata.
1 de noviembre de 2017 - 00:43

Las infecciones intestinales son frecuentes en cerdos de crecimiento y terminación de todo el mundo y causan importantes pérdidas económicas en la producción debido al incremento de la mortalidad y la disminución de la ganancia diaria de peso (GDP).
Las principales entidades que afectan a los cerdos en esta etapa incluyen: enteropatía proliferativa porcina (EPP), causada por Lawsonia intracellularis, disentería porcina (DP), por Brachyspira hyodysenteriae, espiroquetosis intestinal porcina (EIP), causada por Brachyspira pilosicoli y salmonelosis porcina (SP), ocasionada por Salmonella entérica.
Estos agentes han sido identificados en nuestro país, ya sea serológicamente, por bacteriología o PCR.
La prevalencia nacional de granjas positivas fue para Salmonella spp., del 42%; para B. hyodysenteriae y B. pilosicoli del 1,9% y 3,8%, respectivamente, mientras que la seroprevalencia de L. intracellularis fue del 76,5%. En varios estudios se determinó la edad de detección de los agentes enteropatógenos de cerdos de crecimiento y terminación.

Tabla Nº 1. Detección de agentes enteropatógenos, datos productivos y sanitarios en cada granja evaluada.
Granja Cerdas Sitios B. hyodysenteriae (%) L. intracellularis (%) Salmonella spp. (%) Mortandad recría (%) Mortandad engorde (%) Peso recría (kg) Peso engorde (kg) GDP (kg) Días a la venta
1 1000 1 0 15,9 16,7 0,8 3,2 31 119 0,73 163
2 600 1 0 10,7 8,3 3,31 3,5 28,95 111 0,69 159,5
3 2500 3 0 7,7 0 4,58 4,4 23,45 117,3 0,69 170
4 660 1 0 34,7 0 0,8 3,2 31 119 0,7 170
5 1000 2 0 14,9 4,2 2 6 29 109 0,64 171
6 400 1 5,9 14,3 0 10 5 23,18 95,2 0,57 166
7 70 1 7,4 3,7 6,3 104,2 0,59 175,8
8 1500 3 0 24,2 16 1,4 3,5 30 107 0,73 147
Bh: B. hyodysenteriae; Li: L. intracellularis; GDP= ganancia diaria de peso. Kg= kilogramos; -: sin dato.

En condiciones de campo, dichas infecciones ocurren a partir de las 8 semanas de vida, momento en que los cerdos son más susceptibles. Sin embargo, tanto el patrón de infección como la tasa de detección varían dependiendo del país o región analizada, el sistema de producción, el tipo de granja, de muestra, el uso de antibióticos y los procedimientos de diagnóstico utilizados.
La proporción de muestras positivas de B. hyodysenteriae en las explotaciones con antecedentes de diarrea fue diez veces mayor que en las explotaciones sin problemas de diarrea; mientras que L. intracellularis es mayormente detectada en granjas y cerdos con diarrea. Sin embargo, animales sin diarrea pueden ser positivos a estos agentes, especialmente en la infección por L. intracellularis.
Debido a que existe una única cepa de L. intracellularis, se cree que las diferentes presentaciones de EPP (aguda, crónica y subclínica) son el resultado de la dosis infectante, el uso de antibióticos, el estado inmune, la edad del cerdo y la respuesta específica del huésped. Algunos serotipos de Salmonella entérica pueden causar diarrea en cerdos, aunque la mayoría de los serotipos son importantes debido al riesgo zoonótico.
La información sobre las infecciones causadas por L. intracellularis, B. hyodysenteriae, B. pilosicoli y Salmonella spp. en Argentina por lo general es abocada a la detección de uno o dos patógenos simultáneos en cerdos con diarrea. El objetivo de este estudio fue determinar, en condiciones de campo, la dinámica de infección de los enteropatógenos en cerdos de diferentes edades y las variables asociadas al mayor riesgo de detección de L. intracellularis, B. hyodysenteriae, B. pilosicoli y Salmonella enterica en cerdos con y sin diarrea en granjas confinadas.

Metodología
Se evaluaron 8 granjas porcinas en confinamiento. Se obtuvieron 10 muestras de materia fecal de animales sin diarrea y 10 muestras de animales con diarrea de 8, 11, 14, 17, 20 y 24 semanas de vida. La materia fecal se colocó en bolsas plásticas individuales. Se realizó una clasificación de la materia fecal en grados sobre la base de la consistencia y la presencia/ausencia de sangre.
Todas las muestras se refrigeraron hasta su remisión al laboratorio y se congelaron a -20ºC hasta su procesamiento.
Para la extracción y purificación de ADN a partir de heces se utilizaron kits comerciales ZR Fecal DNA MiniPrep, según las indicaciones del fabricante. Para la detección de los genes de L. intracellularis, B. hyodysenteriae y B. pilosicoli se realizó la técnica de PCR multiplex.
Para el aislamiento, identificación y serotipificación de Salmonella spp., se realizaron pooles de materia fecal que incluyeron las muestras de 5 animales.
Para explicar los factores de riesgo asociados a la presencia de cada uno de los agentes estudiados se utilizó un modelo de regresión logística múltiple.
Para el análisis estadístico, se utilizó el programa R. Se consideraron como significativas aquellas asociaciones con valores de p< 0,05.

Resultados
En la Tabla Nº 1 se presentan los porcentajes de detección de cada agente, los datos productivos y sanitarios de cada granja. Dos granjas (6 y 7) usaban un sistema de flujo continuo en engorde, mientras que en las restantes utilizaban sistema todo dentro – todo fuera.
Lawsonia intracellularis se identificó en el 16,22% de los animales (153 cerdos, en las 8 granjas) seguido por B. hyodysenteriae en 1,38% (13 cerdos, en 2 granjas), mientras que B. pilosicoli no fue detectada. Con respecto a Salmonella spp. 6,5% pooles (11/165, de 5 granjas) de materia fecal fueron positivos. Se identificaron los siguientes serotipos de Salmonella entérica a partir de cerdos con y sin diarrea: S.Tennesse (granja 1), S.Derby (granja 7), S. Javiana (granja 2), S. subsp I 3,10,:z10:- (granja 5) y S. subesp I 4,12: i :- (S. Typhimurium, variante monofásica) (granja 8).
Se identificó a L. intracellularis en el 25% de cerdos con diarrea y en el 10, 9% de los sin diarrea, mientras que B. hyodysenteriae sólo se identificó en cerdos con diarrea. En las granjas 4, 6, 7 y 8 se reportaron problemas de diarrea en la etapa de desarrollo-terminación.
En las granjas 6 y 7 se detectó B. hyodysenteriae en materia fecal grado 2 y 3 y moderada a baja detección de L. intracellularis en la materia fecal grado 0 y 1. En las granjas 4 y 8 se observaron los mayores porcentajes de detección de L. intracellularis en todos los grados de materia fecal.
En cuanto a los porcentajes de detección de los agentes enteropatógenos en cerdos con y sin diarrea, en relación a la semana de vida, se destaca que cuando aumentaba el porcentaje de cerdos positivos con diarrea, lo hacía en similar proporción los positivos sin diarrea a L. intracellularis.
El riesgo de detección de L. intracellularis fue mayor en las granjas 1, 4, 5,6 y 8, que en la granja de comparación (granja 7).
Los animales de 24, 20, 17 y 14 semanas de vida, presentaron un riesgo mayor de resultar positivos por PCR a L. intracellularis de 47,4; 30,8, 12,3 y 7,4 que los animales con 8 semanas, mientras que los grados de materia fecal 4, 2 y 1 presentaron riesgo de detección de 32,14; 4,76 y 2,41 veces superior que aquellos con materia fecal grado cero. El riesgo de aislamiento de Salmonella spp., fue 5,5 y 4,6 superior a las 24 y a las 20 semanas que a las 8 semanas de vida.
Ninguna otra asociación fue identificada en relación a Salmonella y L. intracellularis. La regresión logística para la detección de B. hyodysenteriae no se pudo realizar debido a la ausencia de cerdos positivos sin diarrea.

Algunas conclusiones
• Se identificaron L. intracellularis y Salmonella a partir de animales con y sin cuadro clínico, mientras que B. hyodysenteriae solo se detectó a partir de animales con diarrea.
• Lawsonia intracellularis se identificó en todas las granjas, en animales con y sin diarrea, tanto solo como asociado con otros agentes.
• Brachyspira hyodysenteriae solo se detectó en lotes con elevados porcentajes de diarrea, en contraposición a L. intracellularis que se identificó mayoritariamente en lotes con infección subclínica.
• Se reporta por primera vez en Argentina la identificación de una cepa monofásica de S. Typhimurium, patógeno emergente en humanos y que se asocia al consumo de carne de cerdo (S. subespecie 1 (4,12:i:-)).
• La variable “granja” influyó en el riesgo de detección de L. intracellularis. Las características de las granjas tales como el flujo, higiene, manejo, instalaciones, bioseguridad, etc. pueden contribuir a las prevalencias intragranja.
• Las granjas con cuadro clínico de diarrea presentaron un riesgo de detección de L. intracellularis de 14,8 y 8,8 veces más que las granjas sin problemas.
• El riesgo de detección de L. intracellularis y Salmonella spp. aumentó con la edad de los animales.
• El mayor riesgo de detección de L. intracellularis en animales próximos a la faena implica un riesgo para la presentación aguda y de alta mortalidad de EPP.
• El mayor riesgo de aislamiento de Salmonella en animales de 20 y 24 semanas de vida aumenta la posibilidad de enviar cerdos positivos a la faena.
• En las granjas en estudio, cada 2,5 cerdos con diarrea positivos a L. intracellularis, existe 1 sin signos clínicos evidentes y señala la importancia de los animales subclínicos.
• El 81 % de las muestras grado 1 fueron negativas a los 4 agentes estudiados. La diarrea leve en cerdos de engorde podría ser causada por factores no infecciosos u otros infecciosos no incluidos en el estudio.
• La colección de muestras estratégicas (con sangre, mucus, fibrina, etc.), destinadas a un abordaje diagnóstico etiológico poblacional, brinda más posibilidades de detectar el/los agentes/s causales de diarrea.
• La técnica de PCR multiplex es una herramienta valiosa para la detección rápida y simultánea de agentes entéricos a partir de materia fecal en cerdos con infecciones clínicas y subclínicas.
Además, constituye una técnica útil para evaluar la coinfección y la dinámica de las infecciones entéricas.

Aquellos interesados en acceder a la bibliografía consultada y/o al Resumen completo de la Tesis realizada por la médica veterinaria Estefanía Marisol Pérez pueden contactarse vía [email protected].

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