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DIAGNOSTICO DE TUBERCULOSIS BOVINA

Mejoran sensibilidad de PCR para detección de M. bovis en leche de tanque

Opinión

Adriana Soutullo - InmunologiaPor la Lic. Biotecnol. Ana Paula Cislaghi(1,3), Dra. Silvia Fabiano(1), Mg. Cs. Vet. Ana María Canal(2), Dra. Adriana Soutullo(3) (foto)
(1)Laboratorio de Sensores y Biosensores, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, UNL; (2)Laboratorio de Citología y Histopatología,
Facultad de Ciencias Veterinarias, UNL; (3)Laboratorio de Diagnóstico e Investigaciones Agropecuarias del Ministerio de la Producción de Santa Fe.
Contacto: adrianasoutullo@gmail.com.ar

La Tuberculosis bovina (TBB) es una enfermedad infecto contagiosa de distribución mundial producida por las bacterias del Complejo Mycobacterium bovis/tuberculosis. En la Argentina continúa siendo una enfermedad endémica que afecta sobre todo a las cuencas lecheras.
Las repercusiones económicas que esta infección supone para las explotaciones ganaderas, el potencial zoonótico y las implicancias legales debido a las restricciones para el comercio, la convierten en uno de los principales desafíos de la sanidad animal a nivel regional.
El Laboratorio de Diagnóstico e Investigaciones Agropecuarias del Ministerio de la Producción de Santa Fe, junto con el Laboratorio de Sensores y Biosensores de la Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas de la UNL, trabajan en mejorar la calidad diagnóstica y contribuir al control y erradicación de la enfermedad. Si bien en la Argentina el Plan Nacional de Control y Erradicación de la Tuberculosis Bovina, según Resolución Senasa N°128/2012, establece otorgar la certificación oficial de “establecimiento libre de TBB”, según resultados de las pruebas cutáneas de tuberculina (PPD) en cada animal, leídas a las 72 horas de inoculación, hemos acompañado a los Planes Nacional y Provincial desarrollando mejores métodos diagnósticos, tal como la PCRIS6110 para detectar al M. bovis en tanques de leche, en un inicio.
Así, con solo una muestra pudimos saber la condición sanitaria del rodeo, detectando como infectados a un 40% de los establecimientos con certificación oficial “libres”. No obstante, y dependiendo de la carga microbiana del Complejo M. bovis/tuberculosis existente en el tanque de leche, hemos observado resultados negativos con la PCRIS6110 inicialmente desarrollada, a pesar de haber algunas vacas en lactancia con PPD positivas en los establecimientos evaluados.
A los efectos de evitar estos inconvenientes y mejorar aun más el diagnostico complementario al empleado en el control de la tuberculosis bovina según legislación oficial, modificamos la estrategia inicial de la PCR convencional.
Para ello nos propusimos detectar los productos de amplificación de la secuencia génica IS6110, presente en el Complejo M. bovis/tuberculosis, mediante un ELISA, al estar estos productos asociados a moléculas de biotina y digoxigenina. Luego de optimizar cada una de las técnicas por separado y luego integradas, denominándola PCRBIO-ELISA, se analizaron 100 muestras de leche de tanque, habiéndose obtenido un 96% y 82.5% de sensibilidad y especificidad diagnostica, respectivamente, y una sensibilidad analítica 25 veces superior a la PCRIS6110 convencional. Por otra parte, al comparar los resultados de PPD con la técnica desarrollada, hemos observado que 44 muestras de leche de tanque proveniente de tambos con animales PPD (-) tuvieron resultados positivos mediante la PCRBIO-ELISA pero solo el 50% de ellas fueron positivas frente a la PCRIS6110 convencional. Se obtuvieron también similares conclusiones preliminares al aplicar esta técnica combinada para evaluar ADN extraído de tejidos parafinados de órganos bovinos y decomisados en frigoríficos, por lo que a futuro podría ser importante su empleo como una herramienta epidemiológica complementaria.
Nuestro grupo de trabajo no solo ha logrado una mejora sustancial en el diagnostico de TBB en leche de tanque, respecto a nuestro desarrollo inicial, sino que también nos ha permitido detectar los productos amplificados mediante un ELISA sin estar sujeto a interpretaciones subjetivas por parte del operador en la detección de las bandas amplificadas en los geles de inmersión.
Es intención del grupo de trabajo aumentar el número de muestras a analizar por el método diagnóstico desarrollado, de modo de validar aun más los resultados obtenidos.

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